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ELISA试剂盒知多少?
点击次数:123 发布时间:2020-09-02

ELISA简介
酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay) ,简称ELISA,它是实验室zui常用的检测方法。酶是能够催化化学反应的特殊蛋白质,其催化效力超过所有人造催化剂,ELISA就是将抗原和抗体的免疫反应和酶的催化反应相结合而建立的一种新技术。使用酶去标记抗原或抗体以后既不影响抗原抗体反应的特异性, 也不改变酶本身的活性。因此ELISA具有准确性高、检测时间短、价格低廉、判断结果有客观标准、结果便于记录和保存等优点,适合于大批标本的检测,广泛应用于食品安全检测、医疗检测以及免疫实验分析等领域。

ELISA基本原理
1.抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面,并保持器免疫学活性。例如:蛋白质分子结构上的疏水基团与聚苯乙烯表面的疏水基团能产生互作用而吸附。
2.抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性;
3.酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,由此进行定性或定量分析。

ELISA类别
ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体,根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,可设计出各种不同类型的检测方法,主要类型有双抗体夹心法、间接法、竞争法、捕获法等。

双抗体夹心法

双抗体夹心法是检测抗原zui常用的方法,先将已知抗体连接在固相载体上,待测抗原与抗体结合后再与酶标二抗结合,形成抗体-待测抗原-酶标二抗的复合物,复合物的形成量与待测抗体原成正比。

竞争法 


当小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的抗体结合位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法模式。

双抗原夹心法

双抗原夹心法的反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物,以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。

间接法

间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体(抗人免疫球蛋白抗体)以检测与固相抗原结合的受检抗体,故称为间接法。

除了以上常见的4种检测方法外,还有直接法、捕获包被法、竞争法(测抗体)、双抗原夹心法、ABS-ELISA法等其他方法。

ELISA试剂盒样本收集问题分析
1.样本的收集液体类标本: 包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。固体类标本:植物,土壤,食品,药品等

1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

3. 尿液:用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
5. 培养细胞
    
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。6. 组织标本
组织标本:切割标本后,称取1g组织,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。对于植物组织,不好匀浆的话,就在液氮中充分研磨

 

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